Венеции Энцо. Зная, что принца Энцо любят и Джоконда, и Лаура, он предлагает ему помочь бежать с Лаурой. Энцо с презрением отвергает всякое посредничество. Взбешённый Варнава грозит открыть мужу Лауры весь известный ему план побега. (Варнава — шпион священного "совета десяти" и креатура Бадоеро.) Джоконда в отчаянии: она подслушала весь разговор.
Действие второе. Морской берег. Бригантина на якоре. Варнава в костюме рыбака пришёл следить за бригантиной, из которой выходит Энцо. К берегу пристаёт барка с убежавшей от мужа Лаурой. Происходит радостная встреча влюблённых. Энцо делает последние приготовления к побегу. Лаура молится. К ней подкрадывается Джоконда, собираясь заколоть соперницу, но, увидев в её руках чётки своей матери, решается спасти её от грозящей ей опасности. Она предупреждает Лауру, что её супруг
Бадоеро уведомлен о побеге, и предлагает ей убежище на своей собственной барке. Энцо также узнаёт об этом и, так как уже близок галеон с супругом-инквизитором и о побеге нечего думать, он поджигает свою бригантину.
Действие третье. Картина первая. Комната в доме Бадоеро. Инквизитор решил убить жену за измену. Он вручает ей склянку с ядом и с холодной насмешкой поднимает занавес, за которым Лаура видит приготовленный для неё катафалк. Как только муж уходит, вбегает спрятавшаяся Джоконда, вырывает из рук Лауры склянку с ядом и даёт ей другую, с сонным зельем.
Лаура исчезает за занавесом. Джоконда скрывается, и Бадоеро убеждается в том, что жена исполнила его приказание.
Картина вторая. Приёмная зала в доме Бадоеро со входом в комнату, где стоит катафалк. Веселье и пляски. Варнава втаскивает слепую мать Джоконды, будущую жертву инквизиции. Слышен похоронный звон. Бадоеро сообщает гостям о преступлении Лауры и о её наказании. Энцо выбегает из толпы гостей, срывает с себя маску и бросается со шпагой на Бадоеро, но его арестовывают. Джоконда даёт обещание Варнаве принадлежать ему в том случае, если он освободит Энцо.
Действие четвёртое. Полуразвалившееся палаццо на берегу канала Орфано, жилище Джоконды. Вносят тело якобы умершей
Лауры. Джоконда просит своих друзей отыскать её бесследно пропавшую мать. Она в отчаянии, хватается то за кинжал, то за яд. В этом состоянии застаёт её освобождённый Варнавой Энцо. Он собирается убить её за кощунственное похищение тела
Лауры, но в этот момент та просыпается. Джоконда закрывает лицо, чтобы не видеть чужого счастья. В это время вдали слышно пение гребцов. Джоконда накидывает на Лауру свой плащ и отправляет счастливую пару на гондоле. Ей самой хочется бежать с ними, так как уже близок миг расчёта с ненавистным Варнавой, но тот появляется раньше, чем она думала. Джоконда закалывается кинжалом. Варнава кричит ей, что он велел утопить её мать, но она уже не слышит, и он убегает с воплем бешенства и разочарования.
